- ( MW ) 22 kDa został opisany jako posiadający lepszą zdolność do indukowania transferu genu w porównaniu z jego formą rozgałęzioną. Jednak wydajności transfekcji polimeru nie można zwiększyć poza pewną granicę ze względu na cytotoksyczność. Zbadaliśmy potencjał wykorzystania LPEI o MW w zakresie od 1,0 do 9,5 kDa w celu przezwyciężenia tego ograniczenia.
- Za pomocą cytometrii przepływowej porównano polipleksy plazmidowego DNA kodujące białko wzmocnionej zielonej fluorescencji (EGFP) i różne LPEI pod kątem ich wydajności transfekcji i cytotoksyczności w komórkach CHO-K1 i HeLa. Zaangażowanie endolizosomów w transfer genów za pośrednictwem LPEI badano, stosując inhibitor pompy protonowej, bafilomycynę A1 i sacharozę jako środek lizosomotropowy. Zastosowano konfokalną laserową mikroskopię skaningową do oceny wielkości i kształtu polipleksów w warunkach hodowli komórkowej, wykrywania ich lokalizacji endolizosomalnej oraz obserwacji ich translokacji do jądra komórkowego.
- Wydajność transfekcji można zmienić, zmieniając MW i ilość polimeru dostępnego do tworzenia polipleksu. Największą wydajność transfekcji (około 44%), czyli frakcję komórek EGFP-dodatnich, uzyskano przy LPEI 5,6 kDa, natomiast cytotoksyczność pozostała niska. Zaobserwowano kolokalizację polipleksów i endolizosomów i okazało się, że większe polipleksy szczególnie szybko uciekały z kwaśnych organelli. Dla LPEI 5,0 i 9,0 kDa liczba komórek i jąder, które pobrały DNA po 6 godzinach, była podobna, jak określono metodą cytometrii przepływowej.
- Nasze badanie sugeruje, że LPEI o niskich MW są obiecującymi kandydatami do niewirusowego dostarczania genów, ponieważ są bardziej wydajne i znacznie mniej toksyczne niż ich odpowiedniki o wyższej MW .
Opłacalna transfekcja genów przez kompaktowanie DNA w pH 4,0 przy użyciu zakwaszonej polietylenoiminy o długim okresie trwałości .
- Wprowadzenie materiału genetycznego do komórek jest niezbędnym warunkiem aktualnych badań w biologii molekularnej komórki. Chociaż transfekcja dostępnymi w handlu odczynnikami skutkuje doskonałą ekspresją genów, ich wysokie koszty są przeszkodą w eksperymentowaniu z dużą liczbą lub dużą skalą transfekcji.
- Polimer kationowy liniowy – polietylenoimina ( MW 25 000) (PEI), jeden z najbardziej opłacalnych nośników, ułatwia kompaktowanie DNA poprzez tworzenie polipleksów, co prowadzi do wydajnego dostarczania DNA do komórek na drodze endocytozy. Jednak zastosowanie PEI jest nadal ograniczone z powodu znacznej cytotoksyczności i niedopuszczalnego pogorszenia wydajności transfekcji ze względu na jej niską stabilność. Tutaj pokazujemy, że zakwaszenie PEI jest ważne dla jej aktywności transfekcyjnej.
- Rozpuszczenie proszku PEI w 0,2N HCl zapewnia długi okres trwałości do przechowywania PEI w temperaturze 4 i -80 stopni C, a tworzenie polipleksu plazmidowego DNA z PEI jest zoptymalizowane w soli fizjologicznej buforowanej mleczanem przy pH 4,0.
- Ponadto zmiana pożywki hodowlanej 8-12 godzin po transfekcji może zminimalizować cytotoksyczność PEI bez poświęcania wysokiej wydajności transfekcji porównywalnej z wydajnością odczynników handlowych.
- Koszt testu z użyciem zakwaszonego PEI jest drastycznie obniżony do około 1:10 000 w porównaniu z odczynnikami komercyjnymi. Zatem wnioskujemy, że zakwaszenie PEI w sposób zadowalający zapewnia opłacalną, wysokowydajną transfekcję.
Test immunoenzymatyczny mikroprzepływowy z zastosowaniem mikroczipa krzemowego z unieruchomionymi przeciwciałami i detekcją chemiluminescencji.
- Mikrochipy krzemowe z unieruchomionymi przeciwciałami zostały wykorzystane do opracowania mikroprzepływowych testów immunologicznych enzymatycznych z zastosowaniem detekcji chemiluminescencji i peroksydazy chrzanowej (HRP) jako znacznika enzymu. Poliklonalne przeciwciała anty-atrazynowe sprzężono z powierzchnią mikroczipa krzemowego o całkowitym wymiarze 13,1 x 3,2 mm, zawierającą 42 porowate kanały przepływowe o głębokości 235 mikrometrów i szerokości 25 mikrometrów.
- Różne protokoły immobilizacji oparte na kowalencyjnej lub niekowalencyjnej modyfikacji powierzchni krzemionki 3-aminopropylotrietoksysilanem (APTES) lub 3-glicydoksypropylotrimetoksysilanem (GOPS), liniową polietylenoiminą (LPEI, masa cząsteczkowa 750 000) lub rozgałęzioną polietylenoiminą (BPEI, masa cząsteczkowa 25 000), a następnie adsorpcją lub kowalencyjne przyłączenie przeciwciała, oceniano w celu osiągnięcia najlepszej możliwości ponownego użycia, stabilności i czułości mikroprzepływowego testu immunoenzymatycznego (microFEIA).
- Adsorpcja przeciwciał na powierzchni krzemionki zmodyfikowanej LPEI i kowalencyjne przyłączenie do fizycznie zaadsorbowanego BPEI prowadzi do niestabilnych powłok przeciwciał. Kowalencyjne sprzężenie przeciwciał przez aldehyd glutarowy (GA) z trzema różnymi funkcjonalizowanymi powierzchniami krzemionki (APTES-GA, LPEI-GA i GOPS-BPEI-GA) dało powłoki przeciwciał, które można było całkowicie zregenerować przy użyciu 0,4 M glicyny/HCl, pH 2,2.
- Wykazano, że kompozycja buforowa ma dramatyczny wpływ na stabilność testu, gdzie powszechnie stosowana sól fizjologiczna buforowana fosforanami okazała się najmniej odpowiednim wyborem.
- Najlepszą długoterminową stabilność uzyskano dla powierzchni LPEI-GA bez utraty aktywności przeciwciał w ciągu jednego miesiąca. Granice wykrywalności w microFEIA dla trzech różnych powierzchni immunologicznych wynosiły 45, 3,8 i 0,80 ng/l (209, 17,7 i 3,7 pM) odpowiednio dla APTES-GA, LPEI-GA i GOPS-BPEI-GA.
Dostarczanie genów oparte na folianie-PEG-folianie-przeszczepie- polietylenoiminie .
- Folian-glikol polietylenowy-folian szczepiony polietylenoiminą (FPF-g-PEI) zsyntetyzowano przez połączenie kwasu foliowego z obydwoma końcami jednofunkcyjnego PEG, a następnie szczepienie na PEI. Stosunek szczepienia określono stosując prawo Beera, mierząc absorbancję UV przy 363 nm.
- Określono profil pH, średnicę i kształt nośników. Wydajność transfekcji została zoptymalizowana w normalnych komórkach mięśni gładkich (SMC) i komórkach gruczolakoraka okrężnicy CT-26 przy użyciu plazmidowego DNA kodującego gen reporterowy lucyferazy. Wykazano, że wolny kwas foliowy hamuje transfekcję z FPF-2,3 g-PEI przy obojętnym stosunku ładunku.
- Toksyczność względną pomiędzy PEI a zmodyfikowanym nośnikiem mierzono za pomocą testu kolorymetrycznego MTT. Potencjał terapeutyczny pmIFN-gamma skompleksowanego z tymi nośnikami polimerowymi pod względem ekspresji genów określono na poziomie białka i mRNA za pomocą ELISA i RT-PCR. Stwierdzono, że FPF-g-PEI ma liniowe polimery 2,3 folan-PEG-folian (FPF) wszczepione do każdej cząsteczki PEI.
- Zmierzona średnia masa cząsteczkowa wynosiła około 33500 Mw , a profil pH był charakterystyczny dla zdolności do rozrywania endosomów. Mikroskopia sił atomowych (AFM) i dynamiczne rozpraszanie światła laserowego (DLLS) wykazały, że FPF-2,3 g-PEI i PEI (w stosunku wagowym 2) skutecznie skondensowany plazmid
- DNA dające polipleksy sferoidalne o średniej średnicy około 150 nm. FPF-2,3 g-PEI przewyższał PEI pod względem cytotoksyczności i wydajności transfekcji w komórkach nowotworowych. Komórki mięśni gładkich nie wykazywały swoistości wobec kompleksów kwasu foliowego na uwięzi, gdzie kompleksy PEI/pLuc dawały wyższą wydajność.
Preparaty na bazie polietylenoiminy do dostarczania oligonukleotydów.
- Polietylenoimina (PEI) jest dobrze znana jako niewirusowy wektor do dostarczania genów, zwłaszcza do dostarczania oligonukleotydów. Jednak jego zastosowania kliniczne są znacznie ograniczone ze względu na wysoki ładunek kationowy, niskie rozpoznawanie komórek oraz oddziaływanie z białkami i komórkami niedocelowymi w płynach biologicznych, co skutkuje wysoką cytotoksycznością, słabą stabilnością i niską wydajnością transfekcji w transporcie oligonukleotydów.
- Wielu badaczy stwierdziło, że masa cząsteczkowa ( MW ) PEI, stopień rozgałęzionej lub liniowej struktury, stosunek N/P, pojemność buforowa, struktura oligonukleotydów, pH pożywki hodowlanej, surowica i różne typy cząstek opartych na PEI, w tym metody przygotowania, powodują duża różnica w toksyczności komórkowej, stabilności, wydajności transfekcji dla systemów dostarczania oligonukleotydów opartych na PEI.
- Ligandy, małe cząsteczki, peptydy ukierunkowane na sprzęganie, hydrofobowe, hydrofilowe i amfifilowe modyfikacje PEI są również dokładnie badane w celu zmniejszenia toksyczności komórkowej i poprawy stabilności, wydajności transfekcji i efektu terapeutycznego.
- Co więcej, różne inteligentne modyfikacje PEI, takie jak wiązanie reagujące na pH (wiązanie hydrazonowe) i wiązanie wrażliwe na reakcję redoks (wiązanie disiarczkowe) mogą dokładnie kontrolować uwalnianie oligonukleotydów i przyciągnęły uwagę w zakresie wydajnego dostarczania oligonukleotydów.
Polyethylenimine, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-257 | MiTeGen | 4 x 25 ml | 108 EUR |
Snap cap 8mm Polyethylene |
|||
8PEC1 | Scientific Laboratory Supplies | PK1000 | 94.8 EUR |
Polyethylene glycol 1500 |
|||
GK2627-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 52.8 EUR |
Polyethylene glycol 1500 |
|||
GK2627-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 74.4 EUR |
Polyethylene glycol 1500 |
|||
GK2627-500G | Glentham Life Sciences | 500 g | 58.8 EUR |
Polyethylene glycol 6000 |
|||
GC2342-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 52.8 EUR |
Polyethylene glycol 6000 |
|||
GC2342-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 74.4 EUR |
Polyethylene glycol 6000 |
|||
GC2342-500G | Glentham Life Sciences | 500 g | 58.8 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 49.2 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 78 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-250G | Glentham Life Sciences | 250 g | 55.2 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-500G | Glentham Life Sciences | 500 g | 63.6 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-5KG | Glentham Life Sciences | 5 kg | 183.6 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 48 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 74.4 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-250G | Glentham Life Sciences | 250 g | 52.8 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-500G | Glentham Life Sciences | 500 g | 62.4 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-5KG | Glentham Life Sciences | 5 kg | 170.4 EUR |
Polyethylene glycol 4000 |
|||
GX6931-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 52.8 EUR |
Polyethylene glycol 4000 |
|||
GX6931-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 74.4 EUR |
Polyethylene glycol 4000 |
|||
GX6931-500G | Glentham Life Sciences | 500 g | 58.8 EUR |
Polyethylene glycol 1000 |
|||
GC0081-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 55.2 EUR |
Polyethylene glycol 8000 |
|||
GC0902-100G | Glentham Life Sciences | 100 g | 57.6 EUR |
Polyethylene glycol 8000 |
|||
GC0902-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 92.4 EUR |
Polyethylene glycol 8000 |
|||
GC0902-500G | Glentham Life Sciences | 500 g | 74.4 EUR |
Polyethylene Glycol - 200 |
|||
S-3126 | Scientific Laboratory Supplies | 1ML | 44.4 EUR |
Polyethylene Glycol - 400 |
|||
S-3127 | Scientific Laboratory Supplies | 1ML | 87.6 EUR |
Polyethylene Glycol - 600 |
|||
S-3128 | Scientific Laboratory Supplies | 1ML | 45.6 EUR |
Polyethylene glycol 4000 |
|||
GX6931-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 31.7 EUR |
Polyethylene glycol 4000 |
|||
GX6931-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 14.8 EUR |
Polyethylene glycol 4000 |
|||
GX6931-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 19 EUR |
Polyethylene glycol 1000 |
|||
GC0081-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 15.9 EUR |
Polyethylene glycol 8000 |
|||
GC0902-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 46.8 EUR |
Polyethylene glycol 8000 |
|||
GC0902-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 18.2 EUR |
Polyethylene glycol 8000 |
|||
GC0902-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 31.7 EUR |
Polyethylene glycol 6000 |
|||
GC2342-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 31.7 EUR |
Polyethylene glycol 6000 |
|||
GC2342-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 14.8 EUR |
Polyethylene glycol 6000 |
|||
GC2342-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 19 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 31.7 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 10.3 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-250 | Glentham Life Sciences | 250 | 14.8 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-5 | Glentham Life Sciences | 5 | 110.7 EUR |
Polyethylene glycol 300 |
|||
GC9998-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 21.4 EUR |
Polyethylene glycol 200 |
|||
GC3410-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 31.7 EUR |
Polyethylene glycol 200 |
|||
GC3410-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 12.1 EUR |
Polyethylene glycol 200 |
|||
GC3410-5 | Glentham Life Sciences | 5 | 110.7 EUR |
Polyethylene glycol 200 |
|||
GC3410-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 21.4 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 34.8 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 12.1 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-250 | Glentham Life Sciences | 250 | 17 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-5 | Glentham Life Sciences | 5 | 121.7 EUR |
Polyethylene glycol 400 |
|||
GC3481-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 22.9 EUR |
Polyethylene glycol 1500 |
|||
GK2627-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 31.7 EUR |
Polyethylene glycol 1500 |
|||
GK2627-100 | Glentham Life Sciences | 100 | 14.8 EUR |
Polyethylene glycol 1500 |
|||
GK2627-500 | Glentham Life Sciences | 500 | 19 EUR |
PEG 4000 (Polyethylene glycol) |
|||
PB0431 | Bio Basic | 500g | 75.66 EUR |
PEG 6000 (Polyethylene glycol) |
|||
PB0432 | Bio Basic | 500g | 75.66 EUR |
PEG 8000 (Polyethylene glycol) |
|||
PB0433 | Bio Basic | 500g | 75.66 EUR |
Polyethyleneoxide |
|||
20-abx185547 | Abbexa |
|
|
Polyethylene Glycol (PEG) |
|||
abx085411-335kDa55kg | Abbexa | 3.35 kDa; 5.5 kg | 292.8 EUR |
Polyethylene NMR tube rack 1 EA |
|||
Z118257-1EA | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 51.72 EUR |
Polyethyleneglycol 600, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-240 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 600, 50 % v/v, 100 ML |
|||
M-CSS-241 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 1000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-242 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 10000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-243 | MiTeGen | 100 ml | 106 EUR |
Polyethyleneglycol 1500, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-244 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 2000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-245 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 20000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-246 | MiTeGen | 100 ml | 106 EUR |
Polyethyleneglycol 3000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-248 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 3350, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-249 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 400, 100 % v/v, 100 ML |
|||
M-CSS-252 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 4000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-253 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 6000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-255 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 8000, 50 % w/v, 100 ML |
|||
M-CSS-256 | MiTeGen | 100 ml | 106 EUR |
Polyethyleneglycol 200, 100 % v/v, 100 ML |
|||
M-CSS-396 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Polyethyleneglycol 300, 100 % v/v, 100 ML |
|||
M-CSS-397 | MiTeGen | 100 ml | 94 EUR |
Select Cap 16mm Polyethylene |
|||
TUB0124 | Scientific Laboratory Supplies | PK1000 | 64.8 EUR |
Polyethylene Glycol (PEG) CLIA Kit |
|||
20-abx490560 | Abbexa |
|
|
Azlon 150ml Scoop Polyethylene |
|||
SCO1030 | Scientific Laboratory Supplies | PK5 | 31.2 EUR |
Azlon 1000ml Scoop Polyethylene |
|||
SCO1032 | Scientific Laboratory Supplies | PK5 | 53.69 EUR |
Azlon 1500ml Scoop Polyethylene |
|||
SCO1034 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 27.6 EUR |
Polyethylene Glycol (PEG) ELISA Kit |
|||
20-abx258764 | Abbexa |
|
|
Polyethylene QC Standard Blank - 5g |
|||
CRM-PEBLK | Scientific Laboratory Supplies | 5G | 61.2 EUR |
Polyethylene glycol 8000, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC2100-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 94.8 EUR |
Polyethylene glycol 4000, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC0009-1KG | Glentham Life Sciences | 1 kg | 81.6 EUR |
Polyethylene glycol 300, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC0220-1L | Glentham Life Sciences | 1 l | 88.8 EUR |
Polyethylene glycol 400, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC0231-1L | Glentham Life Sciences | 1 l | 79.2 EUR |
Polyethylene glycol 4000, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC0009-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 38 EUR |
Polyethylene glycol 300, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC0220-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 43.5 EUR |
Polyethylene glycol 400, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC0231-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 35.5 EUR |
Polyethylene glycol 1500, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC1353-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 43.9 EUR |
Polyethylene glycol 1500, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC1353-5 | Glentham Life Sciences | 5 | 164.5 EUR |
Polyethylene glycol 8000, BP, Ph. Eur., USP/NF grade |
|||
GC2100-1 | Glentham Life Sciences | 1 | 49.1 EUR |
TELOS 20um Polyethylene Frits 70ml |
|||
810-0000-027T | Scientific Laboratory Supplies | PK100 | 110.4 EUR |
Polyethylene bag 160 x 220 mm with writing area |
|||
DD140214 | Scientific Laboratory Supplies | PK1000 | 142.8 EUR |
Polyethylene support for 40 slides |
|||
DD37778 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 120 EUR |
Polyethylene Glycol (PEG) Antibody |
|||
abx021053-100ug | Abbexa | 100 ug | 1045.2 EUR |
Polyethylene Glycol (PEG) Antibody |
|||
abx021054-100ug | Abbexa | 100 ug | 1045.2 EUR |
Polyethylene Glycol (PEG) Antibody |
|||
20-abx132170 | Abbexa |
|
|
Polyethylene Glycol (PEG) Protein (BSA) |
|||
20-abx651925 | Abbexa |
|
|
Ogólnie rzecz biorąc, wydajne dostarczanie oligonukleotydów można osiągnąć dzięki różnym modyfikacjom PEI ze zoptymalizowanymi parametrami preparatów opartych na PEI lub PEI.