- Glikobiałko z błony ludzkich erytrocytów zostało zidentyfikowane jako receptor dla C3b (CR1). Promuje dysocjację konwertazy C3b,Bb szlaku alternatywnego C3 i rozszczepianie C3b przez inaktywator C3b/ C4b . Odkryliśmy, że CR1 dezaktywuje również konwertazy C3 i C5 szlaku klasycznego. CR1 hamuje zużycie C3 przez konwertazę C3 EAC142 i wzmaga rozpad miejsc C4b ,2a. Na podstawie masy, CR1 jest około 5-10 razy bardziej aktywny niż białko wiążące C4 , inhibitor surowicy C4b ,2a.
- Wiązanie 125I-CR1 z komórkami EAC14 jest hamowane przez C2. Dlatego jest prawdopodobne, że CR1 i C2 konkurują o witrynę na C4b . CR1 hamował konwertazę C5 jeszcze skuteczniej, ale nie miał wpływu na tworzenie się składników późnego dopełniacza .
- W wysokich stężeniach sam CR1 nie ma nieodwracalnego wpływu na C4b związany z komórką . W fazie płynnej CR1 może działać jako kofaktor rozszczepiania łańcucha alfa’ C4b przez inaktywator C3b/ C4b . Dobrze znaną funkcją CR1 jest promowanie przylegania drobnoustrojów lub kompleksów immunologicznych niosących C3b i C4b do komórek.
- Ta interakcja może skutkować uszkodzeniem mikrośrodowiska błony plazmatycznej komórki odpowiadającej, ponieważ zewnętrzne fragmenty C3b i C4b mogą służyć jako dodatkowe miejsca gromadzenia się enzymów kaskady.
- Dlatego chcielibyśmy zaproponować, aby CR1 na powierzchni komórek dostarczał zwiększone miejscowe stężenie silnego inhibitora enzymów amplifikujących układu dopełniacza i zapewniał komórkom mechanizm omijania uszkodzeń, gdy wiążą substraty niosące C3b i C4b .
Oczyszczanie i charakteryzacja białka błonowego (gp45-70), które jest kofaktorem cięcia C3b i C4b .
- W oparciu o wstępne dowody wskazujące, że związane z komórką białko U937 ( ludzka linia komórkowa podobna do monocytów) posiada aktywność kofaktora i nie jest receptorem C3b/ C4b , staraliśmy się dalej scharakteryzować to białko .
- Opracowano sekwencyjną czterokolumnową procedurę oczyszczania, która obejmuje chromatografię powinowactwa C3(H2O) w celu wyizolowania z rozsądną wydajnością i czystością związanego z komórką białka U937 i kilku innych ludzkich linii komórkowych. W oparciu o jego wzór i Mr na SDS-PAGE, kwasowym pI i specyficzności wobec liganda, jest on identyczny z niedawno opisanym glikoproteiną błonową wiążącą C3(H2O) lub C3b z ludzkich PBL i linii komórkowych; nie mając obecnie zidentyfikowanej funkcji, nazwano go gp45-70.
- Po oczyszczeniu tego białka określiliśmy jego możliwości funkcjonalne i porównaliśmy je z innymi białkami dopełniacza o aktywności regulacyjnej skierowanej na składniki zawierające konwertazy C3.
- Białko to było najbardziej wydajnym (50 razy bardziej niż H) dotychczas opisanym kofaktorem dla pierwszego cięcia C3b za pośrednictwem I. Był również kofaktorem dla pierwszego cięcia C4b , ale nie był tak wydajny jak C4b p. Drugie cięcie C3b i C4b nie było skutecznie mediowane.
- Nie miał zdolności do przyspieszania rozpadu w konwertazach C3 szlaku klasycznego lub alternatywnego. W oparciu o ten unikalny profil aktywności i zdolność do znakowania powierzchniowego zmieniliśmy nazwę tej cząsteczki na białko kofaktor błonowy (MCP). Sugerujemy, że białko to odgrywa główną rolę w zapobieganiu autologicznej aktywacji dopełniacza .
Wewnętrzny tioester i kowalencyjne właściwości wiązania białek dopełniacza C3 i C4.
- Wiązanie kowalencyjne składników dopełniacza C3 i C4 ma kluczowe znaczenie dla ich aktywności. Ta reakcja jest możliwa dzięki obecności wewnętrznego tioestru w natywnym białku . Po aktywacji, która obejmuje zmianę konformacyjną zapoczątkowaną przez rozszczepienie pojedynczego wiązania peptydowego, tioester staje się dostępny do reagowania z cząsteczkami z grupami nukleofilowymi.
- Ten opis jest prawdopodobnie wystarczający do wyjaśnienia wiązania izotypu C4A ludzkiego C4 z aminonukleofilami. Wiązanie izotypu C4B i najprawdopodobniej C3 z nukleofilami hydroksylowymi obejmuje jednak resztę histydynową, która atakuje tioester, tworząc wewnątrzcząsteczkowe wiązanie acylo-imidazolowe.
- Uwolniony anion tiolanowy działa następnie jako zasada katalizując wiązanie nukleofilów hydroksylowych, w tym wody, z funkcją acylową.
- Mechanizm ten umożliwia białkom dopełniacza wiązanie się z grupami hydroksylowymi węglowodanów znajdujących się na wszystkich powierzchniach biologicznych, w tym w składnikach ścian komórkowych bakterii. Ponadto szybka hydroliza tioestru zapewnia środki do powstrzymania tej bardzo szkodliwej reakcji w bezpośredniej bliskości miejsca aktywacji.
Wiązanie C4b – białka wiążącego do poryny : molekularny mechanizm oporności surowicy Neisseria gonorrhoeae.
- Przebadaliśmy 29 szczepów Neisseria gonorrhoeae i znaleźliśmy 16/21 szczepów odpornych na zabijanie przez normalną ludzką surowicę i 0/8 szczepów wrażliwych na surowicę, które wiązały regulator dopełniacza , białko wiążące C4b ( C4b p ).
- Mikrobiologiczny C4b p związany z powierzchnią wykazał aktywność kofaktora. Skonstruowaliśmy szczepy gonokokowe z hybrydowymi cząsteczkami porin (Por) pochodzącymi z każdej z głównych grup serologicznych (Por1A i Por1B) N. gonorrhoeae i wykazaliśmy, że pętla 1 Por1A jest wymagana do wiązania C4b p . Pętle Por1B 5 i 7 gonokoków opornych na surowicę razem tworzyły ujemnie naładowaną domenę wiążącą p C4b . Oddziaływania C4b p-Por1B miały charakter jonowy (hamowane przez wysokie stężenie soli lub heparynę), podczas gdy wiązanie C4b p-Por1A było hydrofobowe.
- Jedynie zrekombinowane zmutowane cząsteczki C4b p zawierające NH2-końcowe krótkie konsensusowe powtórzenie łańcucha alfa (SCR1) związane z gonokokami Por1A i Por1B, co sugeruje, że SCR1 zawiera miejsca wiązania Por . Monomery z łańcuchem alfa C4b p nie wiązały gonokoków, co wskazuje, że polimeryczna forma C4b p była wymagana do wiązania .
- Stosując fragmenty fAb przeciwko C4b p SCR1, wiązanie C4b p ze szczepami Por1A i Por1B zostało zahamowane w teście bakteriobójczym surowicy zależnym od dopełniacza .
- Doprowadziło to do całkowitego zabicia tych skądinąd całkowicie opornych na surowicę szczepów tylko w 10% normalnej surowicy, podkreślając znaczenie C4b p w pośredniczeniu w oporności na gonokoki w surowicy.
Białko regulatorowe dopełniacza myszy Crry/p65 wykorzystuje specyficzne mechanizmy zarówno ludzkiego czynnika przyspieszającego rozpad, jak i białka kofaktora błonowego .
- Normalne komórki gospodarza są chronione przed destrukcyjnym działaniem dopełniacza przez białka regulatorowe dopełniacza znajdujące się na powierzchni komórki . U ludzi czynnik przyspieszający rozpad (DAF) i białko kofaktora błonowego (MCP) odgrywają taką biologiczną rolę, hamując konwertazy C3 i C5. DAF i MCP realizują to zadanie dzięki specyficznym mechanizmom, określanym odpowiednio jako aktywność przyspieszająca rozpad i aktywność kofaktora czynnika I.
- U innych gatunków, w tym myszy, strukturalne i/lub funkcjonalne homologi tych białek nie są jeszcze dobrze scharakteryzowane. Wcześniejsze badania wykazały, że mysie białko Crry/p65 ma pewne cechy samoochronnych białek regulatorowych dopełniacza .
- Na przykład, Crry/p65 ulega ekspresji na wielu różnych komórkach mysich, a przy ekspresji na ludzkich komórkach erytroleukemicznych K562 zapobiega odkładaniu się mysich fragmentów C3 na powierzchni komórki podczas aktywacji klasycznego lub alternatywnego szlaku dopełniacza . Zbadaliśmy teraz kofaktor czynnika I i przyspieszającą rozpad aktywność Crry/p65.
- Rekombinowany Crry/p65 wykazuje aktywność kofaktora dla cięcia za pośrednictwem czynnika I zarówno mysiego C3b, jak i C4b . Co zaskakujące, Crry/p65 wykazuje również silnie przyspieszającą rozpad aktywność konwertazy C3 szlaku klasycznego i słabą konwertazy C3 szlaku alternatywnego.
- Dlatego też mysi Crry/p65 wykorzystuje specyficzne mechanizmy zarówno ludzkiego MCP, jak i DAF. Chociaż Crry/p65, podobnie jak MCP i DAF, zawiera tandemowe krótkie konsensusowe powtórzenia (SCR) charakterystyczne dla białek wiążących C3/C4 , Crry/p65 nie jest uważany za genetyczny homolog ani MCP, ani DAF.
- Tak więc Crry/p65 jest przykładem konserwowania ewolucyjnego dwóch specyficznych aktywności w jednym unikalnym białku u jednego gatunku, które są rozproszone w poszczególnych białkach w innym.
Human Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| DLR-C4b-Hu-48T | DL Develop | 48T | 597.6 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| DLR-C4b-Hu-96T | DL Develop | 96T | 776.4 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RD-C4b-Hu-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 600 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RD-C4b-Hu-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 830.4 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RDR-C4b-Hu-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 626.4 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RDR-C4b-Hu-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 868.8 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| DLR-C4b-Mu-48T | DL Develop | 48T | 609.6 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| DLR-C4b-Mu-96T | DL Develop | 96T | 793.2 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RD-C4b-Mu-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 613.2 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RD-C4b-Mu-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 850.8 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RDR-C4b-Mu-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 640.8 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) ELISA Kit |
|||
| RDR-C4b-Mu-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 890.4 EUR |
Human Complement C4b Antibody |
|||
| 11254-05011 | AssayPro | 150 ug | 260.4 EUR |
Complement C4b antibody |
|||
| 70R-5742 | Fitzgerald | 50 ug | 560.4 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) Protein |
|||
| 20-abx166851 | Abbexa |
|
|
Human Complement C4-B (C4B) |
|||
| 1-CSB-YP313364HU | Cusabio |
|
|
Complement C4b Blocking Peptide |
|||
| 33R-7746 | Fitzgerald | 100 ug | 216 EUR |
C4B Antibody (Complement 4b) |
|||
| F40031-0.08ML | NSJ Bioreagents | 0.08 ml | 165 EUR |
Human Complement C4b (C4B) ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
| 9660 | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 927.6 EUR |
Recombinant Human Complement C4B Protein-GST tag |
|||
| CTP-061 | Creative Biolabs | 100ug | Ask for price |
Recombinant Human Complement C4B Protein-His tag |
|||
| CTP-062 | Creative Biolabs | 100ug | Ask for price |
Human Complement C4b Antibody (Biotin Conjugate) |
|||
| 11254-05021 | AssayPro | 150 ug | 331.2 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4b) Protein |
|||
| 20-abx066058 | Abbexa |
|
|
Complement C4-B (C4B) Antibody |
|||
| 20-abx171870 | Abbexa |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Antibody |
|||
| 20-abx102218 | Abbexa |
|
|
Complement C4-B (C4B) Antibody |
|||
| 20-abx109270 | Abbexa |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Antibody |
|||
| 20-abx128779 | Abbexa |
|
|
Complement Component 4b (C4B) Antibody |
|||
| abx025027-400ul | Abbexa | 400 ul | 627.6 EUR |
Complement Component 4b (C4B) Antibody |
|||
| abx025027-80l | Abbexa | 80 µl | 343.2 EUR |
Complement C4-B (C4B) Antibody |
|||
| 20-abx175970 | Abbexa |
|
|
Recombinant Complement Component 4b (C4b) |
|||
| 4-RPB305Hu01 | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Complement C4-B (C4B) |
|||
| 4-RPB305Hu03 | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Complement Component 4b (C4b) |
|||
| 4-RPB305Mu01 | Cloud-Clone |
|
|
Human Complement C4b AssayLite Antibody (FITC Conjugate) |
|||
| 11254-05041 | AssayPro | 150 ug | 513.6 EUR |
Human Complement C4b AssayLite Antibody (RPE Conjugate) |
|||
| 11254-05051 | AssayPro | 150 ug | 513.6 EUR |
Human Complement C4b AssayLite Antibody (APC Conjugate) |
|||
| 11254-05061 | AssayPro | 150 ug | 513.6 EUR |
Human Complement C4b AssayLite Antibody (PerCP Conjugate) |
|||
| 11254-05071 | AssayPro | 150 ug | 565.2 EUR |
Human Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| 20-abx150865 | Abbexa |
|
|
Human Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx250541-96tests | Abbexa | 96 tests | 848.4 EUR |
Human Complement C4-B (C4B) CLIA Kit |
|||
| 20-abx492617 | Abbexa |
|
|
Human Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx575749-96tests | Abbexa | 96 tests | 848.4 EUR |
Human Complement Component 4b (C4b) CLIA Kit |
|||
| abx195282-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Human Complement fragment 4b,C4b ELISA Kit |
|||
| 201-12-0372 | SunredBio | 96 tests | 528 EUR |
Human Complement fragment 4b, C4b ELISA Kit |
|||
| CSB-E09302h-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Human Complement fragment 4b, C4b ELISA Kit |
|||
| 1-CSB-E09302h | Cusabio |
|
|
Human Complement fragment 4b,C4b ELISA Kit |
|||
| CN-04590H1 | ChemNorm | 96T | 538.8 EUR |
Human Complement fragment 4b,C4b ELISA Kit |
|||
| CN-04590H2 | ChemNorm | 48T | 358.8 EUR |
Human Complement C4-B (C4B)， |
|||
| 1-CSB-EP313364HU | Cusabio |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human) |
|||
| 4-PAB305Hu01 | Cloud-Clone |
|
|
Human C4B(Complement C4-B) ELISA Kit |
|||
| EH1279 | FN Test | 96T | 628.92 EUR |
Human C4B/ Complement C4-B ELISA Kit |
|||
| E0316Hu | Sunlong | 1 Kit | 726 EUR |
Human Complement C4- B, C4B ELISA KIT |
|||
| ELI-46850h | Lifescience Market | 96 Tests | 988.8 EUR |
Human Complement fragment 4b(C4b)ELISA Kit |
|||
| GA-E0388HM-48T | GenAsia Biotech | 48T | 346.8 EUR |
Human Complement fragment 4b(C4b)ELISA Kit |
|||
| GA-E0388HM-96T | GenAsia Biotech | 96T | 559.2 EUR |
Human Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Hu-10x96wellstestplate | Cloud-Clone | 10x96-wells test plate | 5402.92 EUR |
Human Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Hu-1x48wellstestplate | Cloud-Clone | 1x48-wells test plate | 550.13 EUR |
Human Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Hu-1x96wellstestplate | Cloud-Clone | 1x96-wells test plate | 734.46 EUR |
Human Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Hu-5x96wellstestplate | Cloud-Clone | 5x96-wells test plate | 2945.08 EUR |
Human Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| 4-SEB305Hu | Cloud-Clone |
|
|
Human Complement C4-B ELISA Kit (C4B) |
|||
| RK01011 | Abclonal | 96 Tests | 625.2 EUR |
Human Complement fragment 4b(C4b)ELISA Kit |
|||
| QY-E04086 | Qayee Biotechnology | 96T | 472.8 EUR |
Human Complement fragment 4b,C4b ELISA Kit |
|||
| YLA2176HU-48T | Shanghai YL Biotech | 48T | 435 EUR |
Human Complement fragment 4b,C4b ELISA Kit |
|||
| YLA2176HU-96T | Shanghai YL Biotech | 96T | 562.5 EUR |
Complement C4-B (C4B) Antibody (Biotin) |
|||
| 20-abx105283 | Abbexa |
|
|
Complement C4-B (C4B) Antibody (HRP) |
|||
| 20-abx108119 | Abbexa |
|
|
Complement C4-B (C4B) Antibody (FITC) |
|||
| 20-abx106702 | Abbexa |
|
|
Complement C4-B (C4B) Antibody (FITC) |
|||
| 20-abx273939 | Abbexa |
|
|
Complement C4-B (C4B) Antibody (Biotin) |
|||
| 20-abx272777 | Abbexa |
|
|
Anti-Complement C4b Monoclonal Antibody (9E587) |
|||
| CTA-103-100ug | Creative Biolabs | 100ug | Ask for price |
Anti-Complement C4b Monoclonal Antibody (9E587) |
|||
| CTA-103-1mg | Creative Biolabs | 1mg | Ask for price |
Rabbit Anti-Complement C4b Polyclonal Antibody |
|||
| CTA-311-100ug | Creative Biolabs | 100ug | Ask for price |
Rabbit Anti-Complement C4b Polyclonal Antibody |
|||
| CTA-311-1mg | Creative Biolabs | 1mg | Ask for price |
CLIA kit for Human C4b (Complement Component 4b) |
|||
| E-CL-H0575 | Elabscience Biotech | 1 plate of 96 wells | 700.8 EUR |
ELISA kit for Human C4b (Complement Component 4b) |
|||
| E-EL-H0823 | Elabscience Biotech | 1 plate of 96 wells | 640.8 EUR |
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human), APC |
|||
| 4-PAB305Hu01-APC | Cloud-Clone |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human), Biotinylated |
|||
| 4-PAB305Hu01-Biotin | Cloud-Clone |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human), Cy3 |
|||
| 4-PAB305Hu01-Cy3 | Cloud-Clone |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human), FITC |
|||
| 4-PAB305Hu01-FITC | Cloud-Clone |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human), HRP |
|||
| 4-PAB305Hu01-HRP | Cloud-Clone |
|
|
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Human), PE |
|||
| 4-PAB305Hu01-PE | Cloud-Clone |
|
|
ELISA kit for Human C4B (Complement C4-B) |
|||
| ELK1872 | ELK Biotech | 1 plate of 96 wells | 518.4 EUR |
ELISA kit for Human Complement fragment 4b (C4b) |
|||
| KTE62582-48T | Abbkine | 48T | 398.4 EUR |
ELISA kit for Human Complement fragment 4b (C4b) |
|||
| KTE62582-5platesof96wells | Abbkine | 5 plates of 96 wells | 2538 EUR |
ELISA kit for Human Complement fragment 4b (C4b) |
|||
| KTE62582-96T | Abbkine | 96T | 646.8 EUR |
Mouse Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| 20-abx153739 | Abbexa |
|
|
Monkey Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx360130-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Pig Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx361866-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Rabbit Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx362241-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Chicken Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx355872-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Mouse Complement C4-B (C4B) CLIA Kit |
|||
| 20-abx492618 | Abbexa |
|
|
Mouse Complement Component 4b (C4B) ELISA Kit |
|||
| abx573371-96tests | Abbexa | 96 tests | 886.8 EUR |
Anti-Complement C4b/d Monoclonal Antibody (16D2) |
|||
| CTA-077-100ug | Creative Biolabs | 100ug | Ask for price |
Anti-Complement C4b/d Monoclonal Antibody (16D2) |
|||
| CTA-077-1mg | Creative Biolabs | 1mg | Ask for price |
Anti-Complement C4b/d Monoclonal Antibody (SPM545) |
|||
| CTA-105-100ug | Creative Biolabs | 100ug | Ask for price |
Anti-Complement C4b/d Monoclonal Antibody (SPM545) |
|||
| CTA-105-1mg | Creative Biolabs | 1mg | Ask for price |
Complement Component 4b (C4b) Polyclonal Antibody (Mouse) |
|||
| 4-PAB305Mu01 | Cloud-Clone |
|
|
Mouse Complement C4- B, C4b ELISA KIT |
|||
| ELI-33888m | Lifescience Market | 96 Tests | 1038 EUR |
Mouse Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Mu-10x96wellstestplate | Cloud-Clone | 10x96-wells test plate | 5552.14 EUR |
Mouse Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Mu-1x48wellstestplate | Cloud-Clone | 1x48-wells test plate | 562.42 EUR |
Mouse Complement C4-B (C4B) ELISA Kit |
|||
| SEB305Mu-1x96wellstestplate | Cloud-Clone | 1x96-wells test plate | 752.02 EUR |
Proponujemy, że powtarzający się motyw SCR w tej rodzinie umożliwił zajście tego niezwykłego procesu ewolucji, być może napędzanego przez użycie MCP i DAF jako receptorów przez ludzkie patogeny, takie jak wirus odry.
