50x TAE
Tris 121g
EDTA 50 ml 500 mM (pH EDTA do pH 8,0 z NaOH najpierw przed dodaniem)
Kwas octowy 28,55 ml
Uzupełnij do 500 ml
Przygotuj 1x TAE z 50x wodą
Nalewanie i rozprowadzanie żelu agarozowego
- podczas pracy z żelem agarozowym nosić rękawiczki, ponieważ bromek etydyny jest bardzo toksyczny
- wyrzucić wszystkie odpady bromku etydyny do plastikowej torby (w tym końcówki pipet, które dotykają żelu podczas ładowania próbek, taśmę do robienia żelu itp.)
- może być konieczne wyczyszczenie aparatu żelowego (grzebienia i plastikowego uchwytu) wodą przed ich użyciem
- w przypadku małych żeli użyj 25 ml 1x TAE
- w przypadku dużych żeli użyj 50 ml 1x TAE
- ogólnie 1% agaroza (0,25 gw 25 ml) będzie działać w przypadku większości fragmentów DNA
- w przypadku większych fragmentów można użyć niższego procentu agarozy, a dla mniejszych fragmentów można użyć wyższego procentu agarozy (0,4% do 2%)
- do ich wykonania używać kolb przeznaczonych na żele agarozowe
- wlej 1x TAE, a następnie dodaj agarozę
- mikrofale przez 30 sekund dla małych żeli i 60 sekund dla dużych żeli
- odczekać aż żel ostygnie (aby przyspieszyć stygnięcie można kolbę uruchomić pod zimną wodą wodociągową)
- gdy żel stygnie, umieść taśmę na obu końcach plastikowego uchwytu na żel i włóż grzebień
- gdy roztwory ostygną do temperatury zbliżonej do dłoni, dodaj bromek etydyny (2uL dla małych żeli, 4uL dla dużych żeli)
- kilkakrotnie przepłukać kolbę gorącą wodą
- gdy żel będzie gotowy do rozprowadzenia, zdejmij taśmę, umieść żel w pudełku z żelem, a następnie zdejmij grzebień (pamiętaj o wypłukaniu)
- podczas uruchamiania żeli ustaw na około 100 V (odłącz przewód w drugim aparacie, aby zapobiec nagrzewaniu się roztworu w drugim aparacie); jeśli wykonujesz ekstrakcję żelową, ustaw napięcie na 80V
- gdy żel będzie gotowy do obejrzenia, wyłącz napięcie, umieść go w plastikowej tacy i zanieś do aparatu
Bromek etydyny powstaje przez dodanie 50 μl stężonego bromku etydyny do 450 μl 1x TAE
